מכונת מיצוי וזיהוי חומצות גרעין אוטומטיות לחלוטין של ניו טק

חמש כוחות:
● מכשיר מוגדר עם מיצוי חומצת גרעין ושלב מטוהר
● מכשיר מוגדר עם מודול חילוץ קולי
● מכשיר מוגדר עם אוטומטי לחלוטין
● מכשיר מוגדר עם הגברה משתנה בטמפרטורה
● מכשיר מוגדר עם ערכת ריאגנטים סגורה לחלוטין

1. האם יש לחלץ ולטהר ריאגנטים לזיהוי חומצות גרעין?
העיקרון של זיהוי חומצות גרעין הוא כדלקמן: תחת פעולת הפריימר, נעשה שימוש ב-DNA פולימראז לביצוע הגברה של תגובת שרשרת על תבנית DNA/RNA (הדורש שעתוק הפוך של NA), ולאחר מכן מזוהה כמות האות הפלורסנטי המשוחרר כדי לקבוע האם הדגימה מכילה את חומצת הגרעין (DNA/RNA) של הפתוגן שיש לגלות.

1) דגימות שלא חולצו או טוהרו עשויות להכיל רכיבים רבים המשפיעים על התוצאה הסופית: נוקלאז (שיכול להמיס את חומצת הגרעין היעד ולגרום לשלילה כוזבת), פרוטאז (שיכול להפחית את ה-DNA פולימראז ולגרום לשלילה כוזבת), מתכת כבדה. מלח (מה שמוביל לנטרול סינתאז וגורם ל-false positive), PH חומצי מדי או אלקליני מדי (שעשוי לגרום לתגובה להיכשל), RNA לא שלם (המוביל לכישלון תעתוק הפוך שגוי).

2) דגימות מסוימות שקשה להגביר ישירות: גראם חיובי וכמה טפילים, בגלל דפנות התא העבות ומבנים אחרים שלהם, אם הם לא עוברים את תהליך המיצוי והטיהור של חומצת גרעין, הערכה נטולת המיצוי עלולה להיכשל עבור כאלה דגימות.

לכן, מומלץ לבחור את ערכת הבדיקה או המכשיר המוגדרים עם שלב מיצוי חומצת הגרעין.

2. מיצוי כימי או מיצוי פיצול קולי פיזי?
באופן כללי, מיצוי כימי יכול להיות מיושם על רוב הטיפול המקדים והטיהור.עם זאת, בחיידקי גראם חיוביים בעלי דופן עבות וטפילים מסוימים, זה גם המקרה שחילוץ כימי אינו יכול להשיג תבניות יעילות של חומצות גרעין, וכתוצאה מכך זיהוי שלילי שגוי.בנוסף, מיצוי כימי משתמש לעתים קרובות בחומרים חזקים, אם הגליון אינו יסודי, קל להכניס אלקלי חזק למערכת התגובה, וכתוצאה מכך תוצאות לא מדויקות.

פיצול אולטראסוני משתמש בריסוק פיזי, אשר נעשה בו שימוש מוצלח על ידי GeneXpert, מיזם מוביל בתחום ה-POCT לשימוש אנושי, ויש לו יתרון מוחלט במיצוי חומצת גרעין של כמה דגימות מורכבות (כגון Mycobacterium tuberculosis).

לכן, מומלץ לבחור ערכת בדיקה או מכשיר המוגדרים עם שלב מיצוי חומצת גרעין.וזה אופטימלי אם יש מודול חילוץ קולי.

3. ידני, חצי אוטומטי ואוטומטי מלא?
זו בעיה של עלות עבודה ויעילות עבודה.כיום, בתי חולים לחיות מחמד ללא מספיק צוות, וחילוץ וגילוי חומצות גרעין היא עבודה הדורשת כישורים וניסיון מסוימים.אין ספק שמכונת המיצוי והזיהוי של חומצות גרעין אוטומטיות לחלוטין היא הבחירה המושלמת.

4. הגברת טמפרטורה קבועה או הגברה משתנה בטמפרטורה?
תגובת ההגברה היא קישור לזיהוי חומצות גרעין, והטכנולוגיה המקצועית המעורבת בקשר זה מורכבת.באופן גס, אנזימים משמשים להגברת חומצת הגרעין.בתהליך ההגברה, אות הפלורסצנטי המוגבר או אות הפלורסצנטי המוטבע מזוהה.באופן כללי, ככל שאות הקרינה מופיע מוקדם יותר, כך גדל תוכן גן המטרה של הדגימה.

הגברת טמפרטורה קבועה היא הגברה של חומצת גרעין בטמפרטורה קבועה, בעוד שהגברת טמפרטורה משתנה היא הגברה מחזורית אך ורק על פי דנטורציה-חישול-הרחבה.זמן ההגברה הקבוע של הטמפרטורה בוצע, בעוד שזמן ההגברה המשתנה בטמפרטורה מושפע מאוד מקצב עליית הטמפרטורה והירידה של המכשיר (כיום, יצרנים רבים הצליחו לבצע 40 מחזורי הגברה תוך כ-30 דקות).

אם תנאי המעבדה טובים והאזורים קפדניים, סביר לומר שההבדל בדיוק בין השניים לא יהיה גדול.עם זאת, הגבלת טמפרטורה משתנה תסנתז יותר תוצרי חומצת גרעין בזמן קצר יותר יחסית.עבור מעבדות ללא צוות יעוד קפדני ואנשי הכשרה מקצועיים, הסיכון לדליפת תרסיס חומצת גרעין יהיה גדול יותר, החיוב השגוי מתרחש ברגע שמתרחשת דליפה, וקשה מאוד לחסל.

בנוסף, הגברה של טמפרטורה קבועה נוטה יותר להגברה לא ספציפית כאשר המדגם מורכב (טמפרטורת התגובה היחסית נמוכה יותר, וככל שטמפרטורת הארכה גבוהה יותר, כך מפרט הקישור של פריימר טוב יותר).

מבחינת הטכנולוגיה הנוכחית, הגברת טמפרטורה משתנה אמינה יותר.

5. כיצד למנוע את הסיכון לדליפה של מוצרי הגברה של חומצות גרעין?
נכון לעכשיו, יצרנים רבים בוחרים את צינור ה-PCR מסוג בלוטות בתור צינור התגובה של חומצת גרעין, אשר אטום על ידי חיכוך, ודנטור הטמפרטורה בדנטורציה בטמפרטורה המשתנה בהגברת ה-PCR בטמפרטורה משתנה מגיעה ל-90 מעלות.
צלזיוס .התהליך החוזר של התפשטות עם חום והתכווצות עם קור מהווה אתגר גדול לאיטום צינור ה-PCR, ולצינור PCR מסוג בלוטות קל יחסית לגרום לדליפה.

עדיף לאמץ את התגובה עם ערכה/צינור אטום לחלוטין כדי למנוע דליפה של תוצר התגובה.זה יהיה מושלם אם ישנה ערכה אטומה לחלוטין למיצוי וגילוי חומצות גרעין.

אז למכונת המיצוי והזיהוי של חומצות גרעין אוטומטיות לחלוטין של New Tech יש את חמש האפשרויות האופטימליות לעיל.